Kiểm soát vi sinh trong sản xuất vô trùng theo GMP-EU hướng dẫn thực hiện

Hướng dẫn vô trùng của FDA cũng nêu rõ rằng, là một phần của quá trình xác nhận phương pháp với các tấm lắng, không được phép để xảy ra hiện tượng khô vì điều này có thể ảnh hưởng đến sự phục hồi của sinh vật.

Đối với các loại kiểm tra sự phù hợp này, chắc chắn sử dụng các chủng chuẩn USP là không đủ, nếu không thì cũng cần phải sử dụng các chủng cách ly từ đơn vị đang được kiểm tra. Yêu cầu này để ngăn các tấm lắng bị khô phải được kiểm tra đối với các tấm lắng đã chọn. Rõ ràng là có sự khác biệt giữa các đĩa phương tiện văn hóa của các nhà sản xuất khác nhau.

Lượng chất đầy 30 ml / đĩa thường thuận lợi hơn 20 ml. Các thử nghiệm như vậy có thể được thực hiện bằng cách cân. Điều này cho thấy rằng, đối với tất cả các mục đích và mục đích, các tấm có sẵn trên thị trường cho thấy mức độ khô cực kỳ thấp (<2%), ngay cả với thời gian tiếp xúc là bốn giờ do FDA đề xuất khi nêu các mức độ.

Với phương pháp lọc , không khí được hút qua các màng lọc (thường là màng lọc gelatine ). Các vi sinh vật bị bắt bởi những thứ này và sau đó có thể được nuôi cấy. Ưu điểm chính của phương pháp lọc là khả năng thực hiện các phép đo đẳng động học (tốc độ hút> tốc độ dòng chảy) cần thiết để có thể đo dưới LF.

Quy trình ép (môi trường nuôi cấy rắn không khí) bao gồm bộ lấy mẫu Anderson, phổ biến ở Hoa Kỳ, bộ lấy mẫu ly tâm Reuter ( RCS ) và bộ lấy mẫu có khe ( phương pháp STA ). Với các phương pháp này, không khí được hút vào, tăng tốc và thổi lên môi trường nuôi cấy rắn.

Do khối lượng của chúng, các hạt và bất kỳ sinh vật nào liên kết với chúng vẫn còn trên môi trường nuôi cấy. Kỹ thuật này chỉ có thể xác định một số kích thước hạt nhất định. Trong khi bộ lấy mẫu Anderson bao gồm một loạt các kích thước hạt với sự sắp xếp theo tầng của sáu tấm sàng, bộ RCS và bộ lấy mẫu khe nhằm mục đích bao phủ phạm vi đặc trưng cho không khí (tuy nhiên, điều này thay đổi, tùy thuộc vào cấp độ sạch của căn phòng).

Tại Hoa Kỳ, phương pháp STA được FDA ưa chuộng. Trong chương Đánh giá vi sinh vật trong phòng sạch và chương Môi trường được kiểm soát khác của USP, mức không khí do đó cũng được đặt với tham chiếu đến STA (Sử dụng bộ lấy mẫu từ khe đến thạch hoặc tương đương). Việc sử dụng các thiết bị lấy mẫu tương đương được cho phép rõ ràng. Với dụng cụ lấy mẫu có khe , không khí cần kiểm tra được thổi vào đĩa thạch đang quay. Điều này làm cho nó có thể phát hiện ô nhiễm liên quan đến thời gian.

Theo nhà sản xuất, tất cả các hạt lớn hơn 0,5 mm đều được phát hiện. Vi khuẩn đôi khi nhỏ hơn thế này, nhưng vì chúng bám vào các hạt nên chúng được phát hiện một cách đáng tin cậy nhờ sự phân tách hạt này.

Nhà sản xuất công bố thời gian phơi sáng lên đến 90 phút. Điều này phù hợp với yêu cầu của các nhà điều tra FDA về việc bao gồm trong một khoảng thời gian dài nhất có thể. Có thể có thể tích thử nghiệm là 55 l / phút, tương ứng với 3,3 m3 / h (tổng thể tích thử nghiệm tối đa: khoảng 5 m 3).

Tuy nhiên, cần phải có các tấm đặc biệt có đường kính 15 cm. Sau đó, chúng được phân tích với một khuôn mẫu được phân loại để nhận biết bối cảnh thời gian. Để tiết kiệm vật liệu, trong nhiều trường hợp, người ta đã đề xuất rằng một chiếc đĩa có thể được sử dụng nhiều lần. Điều này tất nhiên là có thể, nhưng khả năng phát hiện bối cảnh thời gian sau đó bị mất.

Phương pháp RCS rất thực tế. Bộ phận hoạt động bằng pin hoạt động theo nguyên tắc tác động và cho phép tách định tính các vi sinh vật trong không khí từ thể tích mẫu từ 10 đến 1000 lít. Luồng không khí đi vào cánh quạt từ phía trước, được quay bởi cánh quạt và các sinh vật trong không khí được tách ra trên bộ chỉ thị sinh vật trong không khí bằng lực ly tâm.

Cửa thoát gió hướng ra phía sau, song song với dàn lạnh, để ngăn chặn sự nhiễu loạn trong khu vực hút gió. Thể tích mẫu ở tốc độ 6.100 vòng / phút là xấp xỉ 50 l / phút, nhờ đó các hạt nhẹ hơn hoặc nhỏ hơn và những hạt nằm xa bề mặt thạch hơn có đủ thời gian để lắng trong khoảng trống giữa phần bên trong của rôto và bề mặt thạch. .

Vì đạt được tốc độ hút đủ cao và có thể đo được 1 m 3 , nên có thể sử dụng thiết bị này theo LF. Cuối cùng, chúng ta nên xem xét thủ tục xâm nhập (tập hợp các sinh vật trong chất lỏng). Với phương pháp này, một thể tích không khí xác định được hút qua chất lỏng hoặc trực tiếp qua môi trường nuôi cấy. Sau khi trộn đủ, các vi sinh vật có trong không khí được giữ lại trong chất lỏng, sau đó có thể được kiểm tra vi sinh về hàm lượng vi sinh vật.

Mặc dù thủ tục xâm phạm thường được coi là “thủ tục tiêu chuẩn” trong các cuộc điều tra khoa học, nó hiếm khi được sử dụng để kiểm tra thông thường vì nó cực kỳ tốn kém. Câu hỏi đặt ra là, phương pháp nào nên sử dụng thường xuyên? Nhiều nghiên cứu so sánh đã chỉ ra rằng kết quả phụ thuộc rất nhiều vào phương pháp. Vì lý do này, phương pháp được sử dụng phải luôn được nêu rõ về kết quả và yêu cầu. Điều quan trọng là kiểm tra không khí định kỳ luôn được thực hiện với cùng một phương pháp. Đây là cách duy nhất để phát hiện những thay đổi trong chất lượng không khí.

Một miếng gạc bao gồm một thanh để dán miếng bông gòn hoặc miếng alginate. Bề mặt có thể được lau bằng miếng đệm này. Một miếng gạc ẩm (tăm bông được làm ẩm bằng dung dịch NaCl sinh lý vô trùng) được sử dụng để kiểm tra bề mặt khô.

Vật liệu mẫu thu được sau đó được lau trên thạch đậu nành casein. Sau đó, phần trên của miếng đệm có thể được đúc thành thạch đậu nành casein và ủ cả hai đĩa. Một miếng gạc khô được sử dụng để kiểm tra những nơi ẩm ướt (ví dụ như còn sót lại của nước lau trên sàn). Vật liệu mẫu thu thập sau đó được lau trên thạch đậu nành casein.

Phần trên cùng của miếng lót sau đó được cho vào nước dùng đậu nành casein để cô đặc để tìm bằng chứng về pseudomonas aeruginosa. Sau đó ủ đĩa và ống nghiệm. Gạc alginate cho sản lượng vi sinh tốt nhất. Nó nên được sử dụng đặc biệt khi chỉ mong đợi số lượng vi sinh vật nhỏ.

Đầu tiên, miếng đệm trên miếng gạc alginate được ngâm trong dung dịch đệm natri-xitrat. Dung dịch hoặc huyền phù được sử dụng để thực hiện phép thử pha trộn trong thạch đậu nành casein. Đĩa còn lại được đúc thành thạch đậu nành casein và cả hai đĩa đều được ủ.

FIP (Fédération Internationale Pharmaceutique) mô tả phương pháp thú vị này. Cả hai tay đều được rửa trong 1 lít dung dịch nước muối vô trùng, có bổ sung chất trung hòa khử trùng nếu cần thiết. Số lượng vi sinh vật được đo bằng cách lọc các phần của dịch rửa.

Chắc chắn cần thêm 0,1% Tween 80 vào dịch rửa để đảm bảo làm sạch tốt hơn. Số lượng vi sinh vật trên tay có thể được xác định bằng cách lọc dịch rửa và ủ bộ lọc. FIP đề xuất 30 CFU là mức cho cả hai tay. Tuy nhiên, điều này là cao đối với một tay đeo găng và không thể chấp nhận được đối với người kiểm tra.

Nếu bạn muốn sử dụng phương pháp này, bạn nên thực hiện một nghiên cứu so sánh về sự tiếp xúc bằng tay với kết quả chấp nhận được và mức độ của phương pháp rửa tay. Trong tài liệu, phương pháp rửa tay này dường như tương tự như quy trình rửa bề mặt nằm ngang với quá trình lọc tiếp theo.

Theo ý kiến của tôi, quy trình này không đặc biệt phù hợp, vì hầu như không thể không tạo ra các vũng nước, kéo theo các vấn đề riêng của chúng với các sinh vật nước (đặc biệt là pseudomona aeruginosa).

Tính toán số mẫu môi trường cần thiết

Theo gợi ý của USP, nên sử dụng thạch đậu nành casein . Vì môi trường này được quy định để xác định tổng số vi sinh vật trong các sản phẩm cuối cùng, nên nó chắc chắn rất phù hợp cho mục đích này. Các chất khử hoạt tính nên được thêm vào môi trường để bất kỳ chất trung hòa tăng trưởng nào được chọn đều bị bất hoạt.

Điều này đương nhiên luôn xảy ra đối với thử nghiệm bề mặt, vì dư lượng chất khử trùng phải có trên bề mặt được thử nghiệm, cũng như khi tiếp xúc bằng tay đeo găng, chẳng hạn. Một chất phụ gia khử hoạt tính cũng có thể hữu ích cho việc kiểm tra không khí, ví dụ, nếu dự kiến có bụi kháng sinh. Nếu bạn mua các tấm tiếp xúc sẵn sàng sử dụng , bạn sẽ nhận được ít nhất polysorbate và lecithin làm chất trung tính (ví dụ: tấm tiếp xúc từ BBL), cộng với có thể là L-Histidine (ví dụ: tấm Count-Tact từ bioMerieux, chỉ thị sinh vật GK-HYCON từ Biotest và các tấm tiếp xúc từ Heipha).

Nếu bạn đang làm việc với miếng gạc, bạn nên lưu ý rằng dư lượng chất khử trùng có thể được lấy ra trong quá trình lấy bông gạc, điều này có thể khiến bạn cần thêm các chất phù hợp vào môi trường. TCó sự lựa chọn các tổ hợp chất trung tính được khuyến nghị bởi Hiệp hội Vệ sinh và Vi sinh vật học Đức (Deutschen Gesellschaft für Hygiene und Mikrobiologie – DGHM).

Các hỗn hợp khử hoạt tính được đề xuất

• Polysorbate 80 30 g / l, lecithin 3 g / l, L-cysteine 1 g / l, a. giá thầu. 1000 ml
• Polysorbate 80 30 g / l, saponine 30 g / l, L-histidine 1 g / l, L-cysteine 1 g / l, a. giá thầu. 1000 ml
• Polysorbate 80 30 g / l, lecithin 3 g / l, L-histidine 1 g / l, natri thiosulphat 5 g / l, a. giá thầu. 1000 ml
• Polysorbate 80 30 g / l, lecithin 0,3 g / l, L-histidine 0,1 g / l, a. giá thầu. 1000 ml
• B-cyclodextrin 10 mM, a. giá thầu. 1000 ml
• Polysorbate 80 30 g / l, lecithin 3 g / l, natri thiosulphat 5 g / l, CSL 30 g / l, a. giá thầu. 1000 ml

Đặc biệt phải chú ý tránh đưa các sinh vật vào phòng vô trùng ở mặt ngoài của vật liệu thử. Người ta thường cố gắng khử trùng bên ngoài bằng cách phun chất khử trùng. Điều này cần được thực hiện cẩn thận để không ảnh hưởng đến sự thúc đẩy tăng trưởng của môi trường có dư lượng chất khử trùng.

Thủ tục này phải được xác nhận. Tốt hơn là sử dụng đĩa hoặc dải đã khử trùng được bọc hai lớp. Như với tất cả các thử nghiệm vi sinh, môi trường nuôi cấy cần được kiểm tra về khả năng thúc đẩy tăng trưởng. Để làm được điều này, các dải hoặc đĩa thạch phải được cấy lên đến 100 CFU của chủng thử nghiệm thông thường USP hoặc Ph. Eur. 5 (xem bảng 6 và Mục Kiểm tra độ vô trùng).

Bảng 6 Các sinh vật và chủng tham chiếu để kiểm tra sự thúc đẩy tăng trưởng

 

Nhóm sinh vật	Sinh vật	Căng thẳng, ví dụ:
Aerobes	B. subtilis Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Phân lập từ giám sát môi trường	ATCC 6633 ATCC 6538 ATCC 9027
Vi khuẩn kỵ khí	Clostridium sporogenes	ATCC 11437 ATCC 19404
Nấm	Candida albicans Aspergillus niger	ATCC 10231 ATCC 16404

 

Hướng dẫn về vô trùng của FDA nêu những điều kiện sau đây là điều kiện ủ bệnh:

• Aerobes : 48-72 giờ ở 30-35 ° C
• Nấm men và nấm mốc : 5-7 ngày ở 20-25 ° C. Nếu đề xuất của FDA được tuân theo, có nghĩa là phải lấy hai mẫu (một mẫu trong 48-72 giờ ở 30-35 ° C và một trong 5-7 ngày ở 20-25 ° C).

Theo cách thỏa hiệp, một mẫu đơn có thể được lấy và ủ đầu tiên trong 5 (-7) ngày ở 20-25 ° C và sau đó (sau khi đọc tạm thời) 48 (-72) giờ ở 30-35 ° C. Cả hai đề xuất đều đòi hỏi nỗ lực tương đối cao để thực hiện bài kiểm tra và thậm chí nhiều tài liệu hơn (hai bài đọc).

Nếu quá trình ủ trước đó chỉ ở một nhiệt độ, thì việc ủ ở hai nhiệt độ có nghĩa là quá trình ghi xu hướng bị gián đoạn. Nếu bạn quyết định chỉ ủ ở một nhiệt độ (theo gợi ý của FIP, ví dụ: 5 ngày ở 30 ± 2 ° C), thì sự tương đương của quy trình phải được chứng minh trong các thử nghiệm rộng rãi. Điều này loại trừ tất cả các vấn đề được đề cập ở trên, nhưng các nghiên cứu xác nhận thích hợp phải được thực hiện để bao gồm cả các chủng phân lập.

Loại quy trình này được chấp nhận, nhưng FDA tuyên bố rõ ràng rằng, để giám sát môi trường, có thể sử dụng các phương pháp kiểm tra vi sinh khác với các phương pháp truyền thống (ví dụ USP) nếu đã được chứng minh rằng các phương pháp này mang lại kết quả tương đương hoặc tốt hơn. Nếu trước đó chỉ sử dụng một nhiệt độ ủ, thì quy trình này được khuyến nghị, bất chấp các yêu cầu xác nhận, vì có thể tiếp tục ghi lại xu hướng. Câu hỏi về sự cần thiết phải ủ yếm khí của các mẫu giám sát được đặt ra lặp đi lặp lại.

Nếu chúng ta coi rằng các sinh vật kỵ khí xuất hiện ở người với số lượng tương tự như các sinh vật hiếu khí, thì nhu cầu này dường như có thể hiểu được Trong bối cảnh làm đầy môi trường (xem chương 12.E.5 Làm đầy môi trường nuôi cấy (Media Fill) và chương 12.H. 9 Kiểm soát phương tiện nuôi cấy), các nhà điều tra của FDA yêu cầu thông tin về vi khuẩn kỵ khí. Nếu điều này không có sẵn, họ yêu cầu điền vào phương tiện bằng môi trường thioglycolat.

Bằng cách so sánh mức vượt quá trong các thử nghiệm của các mẫu có ủ hiếu khí và kỵ khí, chúng tôi có thể xác định rằng ủ kỵ khí hiếm khi cung cấp thêm thông tin. Trong quá trình làm đầy môi trường, do đó chúng tôi tiến hành ủ yếm khí trên mẫu thứ hai ở một số nơi để chứng tỏ rằng chúng tôi không gặp bất kỳ vấn đề nào với vi khuẩn kỵ khí và việc lấp đầy môi trường nuôi cấy bằng môi trường thioglycolat là không cần thiết.

Nếu môi trường nuôi cấy rắn (đĩa thạch, đĩa tiếp xúc, dải thạch, v.v.) phải được ủ trong điều kiện kỵ khí, thì việc này được thực hiện với số lượng lớn trong bình kỵ khí . Nếu chỉ ủ một số lượng nhỏ, điều này cũng có thể được thực hiện với các túi kỵ khí (ví dụ máy tạo khí GENbag của bioMérieux, Nürtingen). Điều quan trọng là tỷ lệ kỵ khí thực sự có thể đạt được trên các dải thạch, trong đĩa, v.v … Các dải thạch không được kết dính trong bất kỳ trường hợp nào. Nếu có cam, móc phải được đặt trong các tấm để có thể trao đổi khí.

Phương pháp xác nhận vi sinh

Các phương pháp giám sát vi sinh phải được xác nhận. Điều này được đề cập đến trong Hướng dẫn vô trùng của FDA. Các thanh tra viên, đặc biệt là những người từ FDA, cũng sẽ muốn xem các tài liệu liên quan. Thật không may, không phải lúc nào cũng dễ dàng thực hiện các thử nghiệm phù hợp, vì thường không có sẵn thiết bị kỹ thuật cần thiết (chẳng hạn như buồng aerosol để tạo ra đám mây vi khuẩn). Tuy nhiên, có thể thực hiện xác nhận dự kiến ở một mức độ nhất định và gửi điều này nếu cần.

Hình 3.

Trong các phương pháp kiểm tra bề mặt , vấn đề chủ yếu là tỷ lệ thu hồi. Điều này có nghĩa là các bề mặt phải được làm nhiễm bẩn nhân tạo và sau đó được kiểm tra để xem có bao nhiêu sinh vật có thể được phát hiện bằng phương pháp đã chọn. Ở đây, chúng tôi thường cố gắng trả lời câu hỏi này với dữ liệu từ tài liệu.

Trong hình 3, có một bản tóm tắt các thử nghiệm liên quan do tác giả thực hiện. Nguồn được trích dẫn cũng chứa dữ liệu thống kê liên quan. Đối với các phương pháp kiểm tra không khí, Hướng dẫn về vô trùng của FDA yêu cầu các bộ thu nhiệt tích cực phải được hiệu chuẩn và khi sử dụng các tấm lắng, các điều kiện tiếp xúc phải được tối ưu hóa cho thiết bị có thử nghiệm liên quan.

Trong thực tế, các dữ liệu liên quan về lượng không khí được thử nghiệm và tốc độ không khí (quan trọng khi sử dụng thiết bị theo LF) phải được yêu cầu từ nhà sản xuất thiết bị. Trong phòng thí nghiệm, dữ liệu này nên được kiểm tra thường xuyên (sáu tháng) nếu có thể.

Nếu không thể, thiết bị phải được gửi đến và phải có các chứng chỉ thử nghiệm liên quan. Mỗi lô dải thạch, đĩa tiếp xúc, v.v., phải được thử nghiệm về khả năng thúc đẩy tăng trưởng(xem Văn hóa truyền thông trang 14). Nếu môi trường nuôi cấy không được che phủ khi kết thúc quá trình ủ, thì phải chứng minh rằng không thể có sự phát triển của sinh vật bằng cách nhỏ các sinh vật thử nghiệm lên chúng (tối đa 100 CFU, ví dụ như tụ cầu vàng ATCC 6538).

Nó cũng quan trọng để xác nhận quá trình khóa không khí. Đối với điều này, việc cấy vào các sinh vật (đầy đủ các sinh vật, xem Môi trường nuôi cấy trang 14) sau khi khóa khí sẽ cho thấy rằng không có gì phát triển trên môi trường trong môi trường H 2 O 2, formalin, v.v. trong khóa nguyên liệu và do đó các đặc tính thúc đẩy tăng trưởng vẫn hiện diện ở mức độ vừa đủ.

Việc mô tả các quy trình lấy mẫu, v.v. ở đây là chưa đủ (xem chương 14.A Lấy mẫu). Điều đặc biệt quan trọng là xác định trách nhiệm lấy mẫu và, nếu cần, cả việc vận chuyển từ đơn vị đến phòng thí nghiệm xử lý.

Tần suất lấy mẫu vi sinh

Đối với một chương trình giám sát được biên soạn, các tần số thử nghiệm phải được xem xét. Có những hướng dẫn cho việc này trong các chỉ thị của Châu Âu và Châu Mỹ.

Trong khi ở Châu Âu, việc kiểm tra ở cuối quy trình là đủ, thì Hướng dẫn vô trùng của FDA yêu cầu việc giám sát diễn ra trong quá trình sản xuất và chiết rót. Nếu hoạt động có nhiều ca, việc giám sát hàng ngày cũng phải bao gồm mọi ca.

Điều này được hiểu chung là có nghĩa là thử nghiệm trong quá trình sản xuất, trải dài trong quá trình. Các nhà điều tra của FDA cũng yêu cầu sự tập trung vào khu vực làm đầy thực tế.

Lấy mẫu vi sinh không khí

Phần bổ sung cho Hướng dẫn EU-GMP về sản xuất các sản phẩm thuốc vô trùng có chứa thông tin cụ thể về tần suất thử nghiệm. Giám sát vi sinh được yêu cầu trong quá trình sản xuất đối với các quy trình vô trùng, giống như đối với sản xuất của FDA.

Các nhà điều tra của FDA mong đợi các phép đo chung trải rộng trong quá trình sản xuất. Ngược lại, phần bổ sung cho Hướng dẫn EU-GMP để sản xuất các sản phẩm thuốc vô trùng được đáp ứng với việc giám sát dựa trên bước xử lý: không khí trong hoặc cuối quá trình sản xuất.

Kể từ bây giờ, các nhà điều tra của FDA yêu cầu tập trung vào khu vực làm đầy thực tế, theo đó họ muốn có một khoảng thời gian dài được che phủ trong không khí. Trong bảng 7, có các tần số cho các khu vực vô trùng đã được FDA chấp nhận.

Bảng 7 Tần suất kiểm tra không khí trong các khu vực vô trùng

Tần suất kiểm tra không khí trong các khu vực vô trùng
Điểm lấy mẫu	Tính thường xuyên
Khu vực quan trọng A	Sản xuất tại EU: cho các sản phẩm được sản xuất vô trùng, theo lô sau bước xử lý quan trọng. Một phép đo duy nhất nếu một số lô được sản xuất mỗi ngày.
	Sản xuất tại Hoa Kỳ: khi bắt đầu một lô, sau đó cứ sau 2 giờ (tối thiểu 2)
Khu vực quan trọng B	Sản xuất tại EU: sau bước xử lý quan trọng và trong quá trình sử dụng nếu không có nguy cơ gia tăng do phép đo gây ra.
	Sản xuất tại Hoa Kỳ: khi bắt đầu, ở giữa và khi kết thúc sản xuất một lô
Khu vực kiểm soát C	phòng điều hành – hàng ngày đến hàng quý (tùy thuộc vào tần suất sản xuất hoặc sử dụng phòng)
Khu vực có yêu cầu D	Phòng điều hành – hàng tháng đến hàng quý

 

Kiểm vi sinh bề mặt

Phần bổ sung cho Hướng dẫn EU-GMP về sản xuất các sản phẩm thuốc vô trùng cũng chứa thông tin về tần suất thử nghiệm đối với các bề mặt. Giám sát vi sinh được yêu cầu trong quá trình sản xuất đối với các quy trình vô trùng, giống như đối với sản xuất của FDA. Các nhà điều tra của FDA mong đợi các phép đo chung trải rộng trong quá trình sản xuất.

Ngược lại, việc bổ sung EU-GMP-Hướng dẫn sản xuất các sản phẩm thuốc vô trùng yêu cầu mẫu phải được lấy ở cuối bước xử lý quan trọng để sản phẩm thuốc không bị nguy hiểm. Trong bảng 8, có các tần số cho các khu vực vô trùng đã được FDA chấp nhận.

Bảng 8 Tần suất kiểm tra bề mặt trong các khu vực vô trùng

Tần suất kiểm tra bề mặt trong các khu vực vô trùng
Điểm lấy mẫu	Tính thường xuyên
Khu vực quan trọng A
Bề mặt Bề mặt  làm việc  / máy	Sản xuất tại EU: đối với các sản phẩm được sản xuất vô trùng,  mỗi lô sau bước xử lý quan trọng.
	Sản xuất tại Hoa Kỳ: nhiều lần trong một ngày sản xuất
Tường	Sản xuất tại EU: đối với các sản phẩm được sản xuất vô trùng,  mỗi lô sau bước xử lý quan trọng.
	Sản xuất tại Hoa Kỳ: nhiều lần trong một ngày sản xuất
Sàn nhà	Hàng tuần đến hàng quý (theo tần suất sản xuất và sử dụng  phòng)
	Ngoài ra đối với sản xuất của Hoa Kỳ: nhiều lần trong một  ngày sản xuất
Khu vực quan trọng B
Bề mặt Bề mặt  làm việc  / máy	Sản xuất tại EU: sau bước xử lý quan trọng và trong quá trình  sử dụng nếu không có nguy cơ gia tăng do phép đo gây ra.
	Sản xuất tại Hoa Kỳ: nhiều lần trong một ngày sản xuất
Tường	Sản xuất tại EU: sau bước xử lý quan trọng và trong quá trình  sử dụng nếu không có nguy cơ gia tăng do phép đo gây ra.
	Sản xuất tại Hoa Kỳ: nhiều lần trong một ngày sản xuất
Sàn nhà	Sản xuất ở EU: hàng tuần đến hàng tháng (theo tần suất sản  xuất và mức sử dụng phòng)
	Sản xuất tại Hoa Kỳ: nhiều lần trong một ngày sản xuất
Khu vực kiểm soát C
Bảng bề mặt	Hàng tuần đến hàng quý (theo tần suất sản xuất và sử dụng  phòng)
Tường	Hàng tuần đến hàng quý (theo tần suất sản xuất và sử dụng  phòng)
Sàn nhà	Hàng tuần đến hàng quý (theo tần suất sản xuất và sử dụng  phòng)
Khu vực có yêu cầu D
Bảng bề mặt	Hàng tháng đến sáu tháng (tùy thuộc vào mối đe dọa đối với  sản phẩm)
Tường	Hàng tháng đến sáu tháng (tùy thuộc vào mối đe dọa đối với  sản phẩm)
Sàn nhà	Hàng tháng đến sáu tháng (tùy thuộc vào mối đe dọa đối với  sản phẩm)

 

Kiểm tra nhiểm vi sinh nhân viên sản xuất

Phần bổ sung cho Hướng dẫn EU-GMP về sản xuất các sản phẩm thuốc vô trùng cũng bao gồm thông tin về tần suất thử nghiệm để kiểm tra vi sinh của nhân viên. Giám sát vi sinh được yêu cầu trong quá trình sản xuất đối với điều này, giống như đối với sản xuất của FDA. Mẫu phải được lấy lại vào cuối quá trình để không gây nguy hiểm cho các sản phẩm thuốc. Trong bảng 9, có các tần số cho các khu vực vô trùng đã được FDA chấp nhận.

Bảng 9 Tần suất kiểm tra nhân viên sản xuất

Tần suất kiểm tra nhân sự
Vị trí lấy mẫu	Tính thường xuyên
Khu vực quan trọng A
Sản xuất ở EU:
Tay	Liên quan đến lô sau bước xử lý quan trọng
Cánh tay	Hàng tháng sau khi khóa máy bay  (mỗi nhân viên ít nhất 1 lần hàng năm)
Mũ trùm đầu (xung quanh mặt nạ thở)	Hàng tháng sau khi khóa máy bay  (mỗi nhân viên ít nhất 1 lần hàng năm)
Sản xuất tại Mỹ:  vào ngày sản xuất, tất cả nhân viên đều được kiểm tra toàn bộ  (tay, cẳng tay, mũ trùm đầu) khi kết thúc ca làm việc
Khu vực quan trọng B
Sản xuất ở EU:
Tay	Liên quan đến lô sau bước xử lý quan trọng
Cánh tay	Hàng tháng sau khi khóa máy bay  (mỗi nhân viên ít nhất 1 lần hàng năm)
Mũ trùm đầu (xung quanh mặt nạ thở)	Hàng tháng sau khi khóa máy bay  (mỗi nhân viên ít nhất 1 lần hàng năm)
Sản xuất tại Mỹ:  vào ngày sản xuất, tất cả nhân viên đều được kiểm tra toàn bộ  (tay, cẳng tay, mũ trùm đầu) khi kết thúc ca làm việc

Điểm lấy mẫu trong kiểm vi sinh

Các điểm tới hạn phải được xem xét ngay từ đầu khi xác định các điểm lấy mẫu. Kết quả giám sát ban đầu khi thiết lập phòng vô trùng cũng phải được xem xét khi xác định điểm lấy mẫu.

Ví dụ, trong trạm chiết rót, việc kiểm tra chắc chắn được mong đợi ở gần kim chiết rót. Nếu các khu vực có vấn đề khác được đưa ra ánh sáng sau đó (ví dụ, trong quá trình điều tra), những khu vực này cũng phải được đưa vào giám sát định kỳ.

Tuy nhiên, bạn nên lưu ý kiểm tra càng nhiều điểm càng tốt. Điều này sẽ chỉ tạo ra một lượng lớn dữ liệu (và chi phí) mà không có thêm bất kỳ thông tin nào. Trong các cơ sở rất nhỏ gọn thông thường hiện nay, một hoặc hai điểm lấy mẫu trong máy chiết rót là đủ – và tương tự như vậy ở khu vực xung quanh. Báo cáo Kỹ thuật PDA 13 Các nguyên tắc cơ bản được sửa đổi của Chương trình Giám sát Môi trường, đã được đề cập trước đó, chứa một bảng các ví dụ về các điểm lấy mẫu (xem bảng 10).

Bảng 10 Ví dụ về các điểm lấy mẫu (PDA 2001)

 

Ví dụ về các điểm lấy mẫu (PDA 2001)
Hệ thống	Điểm
Không khí (dòng nạp)	Gần thùng chứa đang mở và / hoặc đã lấp đầy
Không khí trong phòng	Gần khu làm việc
Bề mặt (phòng)	Sàn nhà Tay nắm cửa Tường Rèm cửa
Bề mặt (thiết bị)	Dây chuyền chiết rót Bảng điều khiển Nút đậy bát
Nhân sự trên dây chuyền chiết rót	Vân tay (tối thiểu)
Luồng khí laminar (ví dụ: nắp)	Gần khu vực hoạt động đông đúc

Các điểm lấy mẫu phải được xác định rõ ràng (ví dụ không chỉ “trên bàn”, mà “30 cm ở tâm bàn”). Bằng cách mô tả, nó cũng hữu ích để có một sơ đồ của phòng vô trùng với các điểm lấy mẫu được vẽ biểu đồ. Điều này tạo điều kiện thuận lợi cho các cuộc thảo luận trong trường hợp thanh tra.

Đo lường nếu các mức bị vượt quá

Các biện pháp cho việc này chỉ nên được đề cập đến các thuật ngữ chung trong SOP giám sát. Thông tin chi tiết nên được thiết lập trong một SOP riêng biệt.

Nó không chỉ đơn giản là một trường hợp khảo sát và ghi lại kết quả. Nếu cần, các biện pháp khắc phục phải được thực hiện và lập thành văn bản thích hợp.

Đầu tiên, một kế hoạch điều tra (kế hoạch thử nghiệm) phải được lập và sau đó, sau khi thử nghiệm thành công, một báo cáo điều tra phải được biên soạn.

Kế hoạch điều tra

Những điều sau đây phải được kiểm tra như một phần của cuộc điều tra này:

• Kết quả
• Mức độ của vấn đề
• Ảnh hưởng đến sản phẩm
• Các biện pháp kiểm dịch có được yêu cầu không
• Kiểm tra tiếp theo

Và những điều sau đây phải được thực hiện:

• Điều tra để tìm ra nguyên nhân và
• Điều tra các biện pháp để cho thấy sự thành công của họ

Điều quan trọng đầu tiên là phải đặt câu hỏi liệu đây có phải là một câu hỏi về sự sai lệch trong vệ sinh sản xuất hay có thể là một kết quả phòng thí nghiệm không chính xác.

Nếu không có sai sót trong phân tích vi sinh, câu hỏi về ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm có ý nghĩa sống còn. Sản phẩm phải được kiểm dịch nếu sự sai lệch có liên quan đến sản phẩm. Nói chung, không có sự liên quan nào đến sản phẩm nếu ví dụ như có sai lệch trong khóa nhân sự.

Nếu sai lệch có liên quan đến sản phẩm, thì phải tiến hành điều tra để xác định xem chất lượng sản phẩm có thực sự bị ảnh hưởng hay không. Trong Báo cáo kỹ thuật PDA 13 Các nguyên tắc cơ bản sửa đổi của Chương trình Giám sát Môi trường (2001), có một bản tóm tắt hữu ích về các biện pháp khắc phục trong trường hợp có sai lệch (xem bảng 11).

Bảng 11 Các biện pháp khắc phục điển hình nếu vượt quá mức (PDA 2001)

Các biện pháp khắc phục điển hình nếu vượt quá mức (PDA 2001)
Hệ thống	Các biện pháp khắc phục
Không khí trong phòng / HVAC	Xem xét mức độ hoạt động của nhân sự Xem xét / thực hiện các mẫu luồng không khí / kiểm tra khói Xem xét kỹ thuật vô trùng của nhân viên Xem xét các yêu cầu cấp nguồn cho khu vực Kiểm tra bộ lọc khí xem có rò rỉ và chênh lệch áp suất trên bộ lọc không Xem xét các quy trình khử trùng / khử trùng trong phòng, khoảng thời gian khử trùng và hiệu quả của chất khử trùng Kiểm tra chênh lệch áp suất khu vực, đặc biệt đối với lần khử trùng cuối cùng Đánh giá thiết bị cơ khí trong khu vực có thể là nguồn gây ô nhiễm Đánh giá tính toàn vẹn của căn phòng (ví dụ như sơn bong tróc, vết nứt trên trần, tường và sàn) Xem xét rủi ro đối với sản phẩm
Bề mặt cơ sở	Thực hiện điều tra các nguồn có thể gây ô nhiễm Đánh giá thực hành khử trùng / khử trùng Xem xét hồ sơ vệ sinh Xem xét các sự kiện bất thường có thể xảy ra trong quá trình vận hành sản xuất Kiểm tra các khu vực trong quá trình sử dụng Xác minh rằng các kiểm soát không bị phá vỡ Xem xét rủi ro đối với sản phẩm Xác định độ nhạy của chất phân lập đối với chất khử trùng đang được sử dụng Xem xét các phân lập để xuất hiện trong các loại thử nghiệm khác
Nhân sự cấp cao	Đánh giá tác động có thể có của người vận hành đối với sản phẩm Kiểm tra các khu vực trong quá trình sử dụng Xem lại dữ liệu kiểm tra độ vô trùng Xem xét các dữ liệu giám sát môi trường khác cho khu vực Xem xét việc chuẩn bị và hạn sử dụng của các chất khử trùng được sử dụng trên găng tay Xác định tất cả các phân lập độc nhất về hình thái (con người so với môi trường) Đánh giá đào tạo nhân viên vận hành Người điều hành cuộc phỏng vấn cho những nguyên nhân tiềm ẩn Đào tạo lại / yêu cầu nhà điều hành

Nếu cần thiết, phải tiến hành thử nghiệm bổ sung để tìm nguồn gốc của sinh vật. Nếu vượt quá mức hành động, các sinh vật phải luôn được xác định.

Điều này thường sẽ cung cấp thông tin về nguồn gốc của các sinh vật. Khi các biện pháp đã được thực hiện, thử nghiệm thích hợp phải chứng minh rằng chúng đã thành công và khu vực hoặc quy trình đang được kiểm soát trở lại.

Báo cáo điều tra

Sau khi điều tra hoàn tất, một báo cáo điều tra phải được lập, ghi lại những điều sau:

• Điều tra
• Đo
• Xem xét bởi quản lý
• Phân phối cho nhân viên bị ảnh hưởng
• Mọi biện pháp khắc phục trong tương lai

Nhận dạng sinh vật

Các sinh vật được phát hiện phải được xác định là một phần của quá trình giám sát, ít nhất là nếu vượt quá mức. Hy vọng rằng điều này sẽ cung cấp thông tin về nguồn.

Thật không may, các phương pháp thông thường để xác định các sinh vật không phải lúc nào cũng đủ để phát hiện các bối cảnh ô nhiễm rõ ràng. Điều này được nêu rõ ràng trong chương thử nghiệm vô trùng hài hòa mới của Ph. Eur. và Hướng dẫn về vô trùng của FDA cũng có tham chiếu đến điều này.

Bởi vì hầu hết các phòng thí nghiệm vi sinh không có cơ sở để đánh máy phân lập phân tử, người ta thường phải hài lòng với các phương pháp thông thường. Nhưng ngay cả với những kết quả này, vẫn có thể đưa ra những kết luận chắc chắn về nguồn sinh vật có thể dựa trên chủng loại.

• Que Gram dương (sàn, bụi): 10-20%
• Cầu khuẩn Gram dương (nguồn gốc người và động vật): 80-85%
• Que Gram âm (nước, sàn): 5-10%
• Nấm men và nấm mốc: 2-5%

Phần sau đây trình bày một số khả năng đối với quy trình kiểm tra để xác định các chủng (vi khuẩn) phân lập trong giám sát môi trường.

Điều cực kỳ quan trọng cần lưu ý là loại công việc này được điều chỉnh bởi luật bảo vệ chống lây nhiễm và do đó phải được thông báo cho các cơ quan có trách nhiệm ( đơn vị dịch bệnh của chính quyền khu vực chịu trách nhiệm) và được họ chấp thuận.

Thông thường, không phải tất cả các khuẩn lạc vượt quá một mức đều được xác định và người ta phải hài lòng với việc xác định tất cả các khuẩn lạc khác nhau về hình thái.

Điều cực kỳ quan trọng là phải chạy một, hoặc thường xuyên, thậm chí là hai đoạn trên thạch máu để có được một thuộc địa duy nhất. Các sinh vật được hồi sinh nhờ điều này và có tiềm năng thực hiện các phản ứng sinh hóa điển hình của chúng.

Hình 4 Quy trình kiểm tra để xác định các chủng phân lập từ giám sát môi trường – sự phát triển của các mẫu cấy tinh khiết và nhuộm gram

Các sơ đồ sau đây trình bày các quy trình kiểm tra đối với que gram âm (hình 5), que gram dương (hình 6), cầu khuẩn gram âm (hình 7) và cầu khuẩn gram dương. (hình 8). Hệ thống nhận dạng api bioMérieux được nêu làm ví dụ. Các hệ thống khác có sẵn trên thị trường tất nhiên cũng có thể được sử dụng ở đây.

Hình 5 Quy trình kiểm tra để xác định các chủng phân lập từ giám sát môi trường – xác định các que gram âm

 

Hình 6 Quy trình kiểm tra để xác định các chủng phân lập từ giám sát môi trường – xác định các que gram dương

 

Hình 7 Quy trình kiểm tra để xác định các chủng phân lập từ giám sát môi trường – xác định cầu khuẩn gram âm

 

 

Hình 8 Quy trình kiểm tra để xác định các chủng phân lập từ giám sát môi trường – xác định cầu khuẩn gram dương

 

Tất nhiên, nếu chỉ xem xét vi khuẩn thì không đủ. Nếu vấn đề với nấm xảy ra, trước tiên phải phân biệt giữa nấm men và nấm mốc.

Nếu cần xác định chính xác hơn, người ta thường phải nhờ đến các chuyên gia vì ít nhất đối với nấm mốc, không có hệ thống nhận dạng đáng tin cậy nào trên thị trường. Vì mọi sinh vật được tìm thấy thường không thể được xác định vì lý do năng lực, nên người ta phải quyết định khi nào muốn xác định các sinh vật đó và ở mức độ nào.

Theo Hướng dẫn vô trùng của FDA, các sinh vật phải được xác định ở cấp độ loài càng nhiều càng tốt và – nếu thích hợp – đến cấp độ chi. Nếu mức hoạt động vượt quá ở mức độ sạch A và B , các sinh vật chắc chắn phải được xác định ở cấp độ loài nếu có thể.

Nếu mức độ cảnh báo bị vượt quá thì việc xác định ở cấp độ chi thường là đủ. Nếu nghi ngờ có các sinh vật đặc biệt, ví dụ: giả bào tử hoặc pseudomonads, thì chúng cũng cần được xác định. Ở cấp độ sạch C , việc xác định cấp độ chi thường là đủ nếu vượt quá cấp độ hoạt động.

Nếu có nghi ngờ về sự hiện diện của các sinh vật đặc biệt, ví dụ: giả bào tử hoặc pseudomonads, chúng cũng nên được xác định ở đây. Đối với các chủng phân lập từ cấp D , cần xác định các khuẩn lạc xuất hiện đặc biệt thường xuyên. Nhuộm Gram thường là đủ.

 

Bản tóm tắt – Kiểm soát vi sinh trong sản xuất vô trùng

Khi sản xuất và đóng gói các sản phẩm thuốc vô trùng, tất cả các nguồn có thể gây ô nhiễm vi sinh vật từ môi trường phải được kiểm soát. Điều này chủ yếu liên quan đến không khí, bề mặt và con người. Một chương trình giám sát phải được thiết lập cho việc này, trong đó các cấp độ, điểm lấy mẫu, tần suất, phương pháp / thiết bị và các biện pháp trong trường hợp có sai lệch, trong số những thứ khác, phải được quy định. Những điểm riêng lẻ này được khám phá và đưa ra các đề xuất để triển khai thực tế.

Thiết kế phòng sạch là một chuyên nghành mới, web muốn cung cấp các kiến thức cơ bản nhất về thiết kế phòng sạch